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PCR實(shi)驗室(shi)并(bing)沒有嚴(yan)(yan)格的(de)凈(jing)化要求(qiu),但是(shi)為避免各個實(shi)驗區域間交叉污染的(de)可能性,宜采用全送(song)全排(pai)的(de)氣流組織(zhi)形(xing)式。同時,要嚴(yan)(yan)格控制(zhi)送(song)、排(pai)風(feng)的(de)比(bi)例以保證各實(shi)驗區的(de)壓力(li)要求(qiu)。
1、試(shi)(shi)劑(ji)(ji)貯(zhu)存(cun)(cun)和準(zhun)備區 該實驗區主要進行的(de)(de)(de)(de)操作(zuo)為貯(zhu)存(cun)(cun)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)制(zhi)(zhi)備、試(shi)(shi)劑(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)分裝和主反應(ying)(ying)混合液(ye)的(de)(de)(de)(de)制(zhi)(zhi)備。試(shi)(shi)劑(ji)(ji)和用于標(biao)本(ben)制(zhi)(zhi)作(zuo)的(de)(de)(de)(de)材料應(ying)(ying)直(zhi)接運(yun)送至該區,不(bu)得(de)經(jing)過其(qi)他區域。試(shi)(shi)劑(ji)(ji)原材料必須貯(zhu)存(cun)(cun)在本(ben)區內(nei),并(bing)在本(ben)區內(nei)制(zhi)(zhi)備成所需(xu)的(de)(de)(de)(de)貯(zhu)存(cun)(cun)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)。 對與氣流壓(ya)力(li)的(de)(de)(de)(de)控制(zhi)(zhi),本(ben)區并(bing)沒有(you)嚴格的(de)(de)(de)(de)要求。
2、標(biao)本(ben)制備(bei)區(qu)(qu)(qu) 該區(qu)(qu)(qu)域(yu)主要進(jin)行的(de)操(cao)作為(wei)臨(lin)床標(biao)本(ben)的(de)保存(cun)、核酸(RNA、DNA)提(ti)取、貯存(cun)及其加入(ru)至擴增反應(ying)管和測定RNA時cDNA的(de)合成。本(ben)區(qu)(qu)(qu)的(de)壓力梯度要求為(wei):相對于(yu)鄰近區(qu)(qu)(qu)域(yu)為(wei)正壓,以(yi)避(bi)免從鄰近區(qu)(qu)(qu)進(jin)入(ru)本(ben)區(qu)(qu)(qu)的(de)氣(qi)溶膠(jiao)污染。另外(wai),由于(yu)在(zai)加樣操(cao)作中可能會發生氣(qi)溶膠(jiao)所致的(de)污染,所以(yi)應(ying)避(bi)免在(zai)本(ben)區(qu)(qu)(qu)內不必要的(de)走(zou)動(dong)。
3、擴(kuo)(kuo)增反(fan)(fan)應(ying)(ying)混(hun)合(he)物配制和(he)擴(kuo)(kuo)增區 該區域主要進(jin)行的(de)操作為DNA或cDNA擴(kuo)(kuo)增。此外,已(yi)制備的(de)DNA模板和(he)合(he)成的(de)cDNA(來自樣(yang)本(ben)(ben)(ben)制備區)的(de)加(jia)入和(he)主反(fan)(fan)應(ying)(ying)混(hun)合(he)液(來自試劑貯存和(he)制備區)制備成反(fan)(fan)應(ying)(ying)混(hun)合(he)液等也可在(zai)本(ben)(ben)(ben)區內進(jin)行。在(zai)巢(chao)式PCR測(ce)定中,通常在(zai)擴(kuo)(kuo)增后必須打開反(fan)(fan)應(ying)(ying)管(guan),因此巢(chao)式擴(kuo)(kuo)增有(you)較高的(de)污(wu)染(ran)危險性,第二次加(jia)樣(yang)必須在(zai)本(ben)(ben)(ben)區內進(jin)行。 本(ben)(ben)(ben)區的(de)壓力梯度要求(qiu)為:相對于鄰近區域為負(fu)壓,以避(bi)免氣溶膠從本(ben)(ben)(ben)區漏出。為避(bi)免氣溶膠所致的(de)污(wu)染(ran),應(ying)(ying)盡(jin)量減少在(zai)本(ben)(ben)(ben)區內的(de)不必要的(de)走(zou)動。個別操作如加(jia)樣(yang)等應(ying)(ying)在(zai)超(chao)凈臺(tai)內進(jin)行。
4、擴(kuo)(kuo)增(zeng)產物(wu)分析區(qu)該區(qu)域(yu)(yu)(yu)主(zhu)要(yao)進行的(de)(de)操(cao)作為擴(kuo)(kuo)增(zeng)片段(duan)的(de)(de)測(ce)定。如使用全自動封閉(bi)分析儀(yi)器檢測(ce),此區(qu)域(yu)(yu)(yu)可(ke)不設。本(ben)區(qu)是主(zhu)要(yao)的(de)(de)擴(kuo)(kuo)增(zeng)產物(wu)污染來源,因此對本(ben)區(qu)的(de)(de)壓力梯度的(de)(de)要(yao)求為:相對于鄰近(jin)區(qu)域(yu)(yu)(yu)為負壓,以避免擴(kuo)(kuo)增(zeng)產物(wu)從本(ben)區(qu)擴(kuo)(kuo)散至其它區(qu)域(yu)(yu)(yu)。